Bacterias recombinantes como herramienta para el silenciamiento de genes de la broca del café, Hypothenemus Hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae)
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Grueso, Nathalie | 2023-11-27
spa:La broca del café, Hypothenemus hampei (Ferrari), es un insecto del orden coleóptera originario de África Central que se ha expandido a todos los países productores de café, generando millonarias pérdidas a los caficultores a nivel mundial debido al daño directo que ocasiona al grano de café. En Colombia se ha recomendado e implementado el plan de Manejo Integrado de la Broca (MIB), conformado por controles culturales, biológicos y químicos como medida para el manejo de este insecto plaga. A pesar de ello, es necesario desarrollar métodos adicionales de control de la broca que aseguren una producción más rentable del café. Por esta razón, actualmente se están desarrollando estrategias de control génico del insecto basados en el mecanismo natural denominado ARN de interferencia (ARNi), el cual es altamente específico y de bajo impacto para el ambiente. En esta investigación se evaluaron el uso de bacterias como vehículo para la producción y liberación de secuencias inductoras de silenciamiento, y el silenciamiento de genes en la broca del café. También se evaluaron genes endógenos del insecto como normalizadores en PCR cuantitativa (RT-qPCR) para la validación de silenciamiento. El uso de la bacteria recombinante Escherichia coli HT115 (DE3) para producir y liberar ARN doble-cadena (ARNdc) en el tracto digestivo del insecto permitió el silenciamiento de los genes mananasas 1 y 2 en la broca del café reduciendo entre 57% y 66% los niveles de ARN mensajero (ARNm), y un 47% en el caso del transcrito HhXYL2. Como normalizadores para qPCR se mostraron que los genes RPL7, GAPDH, EF1-alpha y Beta-actina presentaron alta estabilidad de expresión bajo las condiciones de bioensayos para silenciamiento génico en la broca. Los resultados presentados constituyen una prueba de concepto del uso de ARNi mediado por bacterias para el silenciamiento efectivo de genes de la broca y su potencial uso en el desarrollo de estrategias complementarias para el control de esta plaga.
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