TY - THES 
TI - Efectos de la aplicación de secuencias de ARN de cadena doble (ARNcd) en el silenciamiento del virus del mosaico del pepino (CMV)
AU - Villegas-Estrada, Bernardo
AB - spa:El silenciamiento génico postranscripcional (PTGS) es un mecanismo de defensa vegetal conservado evolutivamente contra los virus. Este trabajo tuvo como objetivos probar una construcción de dsDNA (77 pb) como plantilla para la producción in vitro de ARN de horquilla pequeña artificial (shRNA) derivado de virus, además de evaluar tanto estos como  RNAs de doble cadena derivados de virus (dsRNA), también producidos in vitro, su potencial para desencadenar el mecanismo de ARNi en plantas de Nicotiana benthamiana contra CMV después de su infiltración foliar. Este enfoque permitió la producción de cantidades significativas de shRNA (60-mers) y de dsRNA (492-508-mers) de forma rápida y sencilla. El silenciamiento de los genes de CMV provocado por shRNA se confirmó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), ensayos basados en inmunología y PCR en tiempo real (qPCR), mientras que el silenciamiento de los genes provocado por los dsRNA fue confirmado preliminarmente por PCR, Dot-blot y RT-qPCR. Los niveles más altos de silenciamiento génico por la mezcla de shRNAs se registraron para los ARNm que codifican la proteína de replicación (ORF1a), el supresor viral del silenciamiento de ARN (ORF2b) y la proteína de la cápside (ORF3b) con 98, 94 y 70 % del silenciamiento total de la transcripción, respectivamente, al igual que para la mezcla de dsRNAs cuyos niveles de silenciamiento fueron  de 78 %, 65 % y 72 %, respectivamente, para  los genes ORF1, ORF2a y ORF3b. El protocolo  proporciona una alternativa a la producción de shRNA significativos y la aplicación tanto de estos como de dsRNAs que pueden desencadenar eficazmente el mecanismo de RNAi contra CMV.
DA - 2022-07-15
KW - CMV
KW - Proteina de la cápside
KW - Nicotiana benthamiana
KW - Silenciamiento génico
KW - shRNA
KW - dsRNA
KW - Genética
KW - Genes
UR - https://repositorio.ucaldas.edu.co/handle/ucaldas/17836
ER -